在法庭的聚光燈尚未亮起之前，在法官的法槌尚未落下之前，一場無聲的較量已在PCR儀的嗡鳴聲中展開。樣本的采集袋貼著防撕標簽，離心機的轉(zhuǎn)子計數(shù)到小數(shù)點后四位，試劑批號與校準日期被逐條錄入LIMS系統(tǒng)——這些看似瑣碎的動作，其實都在為最后那一紙鑒定書筑起“不可推翻”的銅墻鐵壁。當遺傳標記的峰圖最終排列成無可爭議的階梯，靜默便擁有了比吶喊更大的力量。

一、核心技術(shù)原理

現(xiàn)代親子鑒定主要依賴DNA分型技術(shù)，核心在于分析個體間特定的遺傳標記（STR位點）的匹配程度。

人類遺傳基礎(chǔ)：除同卵**外，每個人的DNA序列都具有唯一性。子女的DNA一半來自生父，一半來自生母。

STR位點：即短串聯(lián)重復序列，是DNA上特定位置的重復堿基序列（如“AGAT”重復多次）。不同個體在同一STR位點上的重復次數(shù)通常不同。

分型檢測：通過聚合酶鏈式反應（PCR）技術(shù)，大量擴增樣本DNA中的特定STR位點片段，然后利用毛細管電泳等技術(shù)精確測定每個STR位點的片段長度（即重復次數(shù)），從而得到個體的DNA遺傳圖譜。

親緣關(guān)系判定：將被測孩子（C）的DNA圖譜與假定父親（AF）和/或假定母親（AM）的圖譜進行比對。在每個檢測的STR位點上，孩子的一個等位基因必須來自生父，一個來自生母。通過統(tǒng)計學方法計算親權(quán)指數(shù)（PI）和累積親權(quán)指數(shù)（CPI），最終得出親權(quán)概率（RCP），通常要求RCP≥99、99%才能支持存在親子關(guān)系。

二、標準化技術(shù)操作流程

（一）樣本采集（關(guān)鍵第一步）

1、人員準備：

確認所有參與者的身份（司法鑒定需核對證件原件）。

簽署知情同意書（司法鑒定需按手?。?。

采集人員需佩戴干凈手套，必要時佩戴口罩、帽子。

2、常用樣本類型與采集方法：

口腔拭子（最常用、無創(chuàng)、推薦首選）：

請被采樣人清水漱口（半小時內(nèi)勿進食飲水）。

取出無菌醫(yī)用棉簽，緊握棉簽桿，將棉簽頭在口腔內(nèi)壁（臉頰內(nèi)側(cè)）用力旋轉(zhuǎn)刮擦至少20-30次，確保充分接觸粘膜細胞。同法采集另一側(cè)。

將棉簽垂直放置在清潔的采樣卡或干凈白紙上，自然晾干（避免陽光直射、熱源烘烤，切勿用嘴吹）。

完全干燥后（通常需30-60分鐘），放入干凈的紙質(zhì)信封袋，標記清晰信息（姓名、采樣日期、關(guān)系如“子”、“父”等）。切勿使用塑料袋密封，以防霉變。

關(guān)鍵點：避免棉簽接觸其他物品；確保充分刮擦獲得足夠細胞；徹底干燥是防止霉變降解的關(guān)鍵。

靜脈血（司法鑒定常用）：

由專業(yè)醫(yī)護人員操作。

常規(guī)消毒穿刺部位，抽取適量靜脈血（通常2-5mlEDTA抗凝血）。

輕輕顛倒混勻抗凝管數(shù)次。

標記清楚，按機構(gòu)要求保存（通常4℃冷藏）和運輸。

血痕樣本：

消毒指尖（或耳垂），用一次性采血針輕刺。

取3-5滴血液（每滴約黃豆大?。┑卧趯Ｓ貌裳ǎㄈ鏔TA卡）或干凈濾紙上。

自然晾干（避免重疊、污染、暴曬、烘烤）。

完全干燥后放入紙質(zhì)信封袋，標記清楚。

特殊樣本（如毛發(fā)、煙頭、口香糖、精斑等）：

此類樣本DNA含量少或易降解，需特殊處理，務必提前咨詢鑒定機構(gòu)確認是否可檢及具體要求。

例如毛發(fā)：需帶有肉眼可見的毛囊（根部白色小囊），至少5-8根。手捏毛干部分取下，勿觸碰毛囊。晾干后放入紙袋。

3、樣本標記與封裝：

每個樣本獨立包裝，在包裝袋外清晰、牢固地標記唯一編號、姓名（或代號）、樣本類型、采樣日期、關(guān)系。

所有樣本連同填寫完整的委托書、身份證明復印件（司法鑒定需要）等一同放入大信封或樣本盒。司法鑒定樣本需當場封存，當事人及采樣人簽字/按手印確認。

生物安全：所有樣本均視為潛在生物危害物，封裝需防泄漏，運輸需符合相關(guān)生物安全規(guī)定。

（二）樣本保存與運輸

口腔拭子/血痕卡：常溫、干燥、避光保存。盡快送檢（通常建議采樣后一周內(nèi)送達實驗室）。避免高溫、高濕、化學污染。

靜脈血：需冷藏（2-8℃）保存和運輸（冰袋或冷鏈）。嚴禁冷凍，否則會溶血破壞細胞。盡快送檢（通常建議24-48小時內(nèi)）。

特殊樣本：按機構(gòu)具體要求保存（如冷凍、干燥等），盡快送檢。

運輸：選擇可靠的快遞公司，確保包裝牢固、防壓、防漏、符合生物安全要求。告知快遞內(nèi)含生物樣本。

（三）實驗室檢測

樣本抵達具備資質(zhì)的實驗室后，將經(jīng)歷嚴格流程：

1、樣本接收與登記：核對樣本信息、數(shù)量、狀態(tài)（是否污染、霉變、滲漏等），登記入庫，分配唯一實驗編號。狀態(tài)異常會聯(lián)系委托方。

2、DNA提?。?/strong>在專門的樣本制備區(qū)進行。

口腔拭子/血痕卡：剪下含樣本部分，使用裂解液（含蛋白酶K）消化細胞膜、核膜，釋放DNA。

靜脈血：離心分離白細胞，裂解釋放DNA。

特殊樣本：采用針對性方法（如毛囊刮取、精斑浸泡等）提取。

通過離心柱吸附法或磁珠法等純化DNA，去除雜質(zhì)（蛋白質(zhì)、色素、抑制劑等）。

3、DNA定量與質(zhì)檢：使用紫外分光光度計或熒光定量儀測量DNA濃度和純度（如A260/A280比值），確保提取的DNA質(zhì)量和數(shù)量滿足后續(xù)PCR擴增要求。

4、PCR擴增：在PCR準備區(qū)配置反應體系。

將提取的DNA、引物（特異性識別STR位點兩端）、TaqDNA聚合酶、dNTPs（合成原料）、緩沖液等混合。

在PCR儀中進行熱循環(huán)：變性（高溫解鏈DNA）→退火（引物結(jié)合到模板）→延伸（合成新鏈）。經(jīng)過約30個循環(huán)，目標STR片段被指數(shù)級擴增。

5、STR分型檢測：在擴增產(chǎn)物分析區(qū)進行。

毛細管電泳（主流方法）：將PCR產(chǎn)物與內(nèi)標（SizeStandard）和去離子甲酰胺混合，上樣到毛細管電泳儀。在高電壓下，不同長度的DNA片段在毛細管內(nèi)的聚合物中遷移速度不同。通過激光激發(fā)熒光標記（引物上帶有不同顏色的熒光染料），檢測器記錄每個片段的出峰時間和熒光顏色。

數(shù)據(jù)采集與分析：專業(yè)軟件將電泳信號轉(zhuǎn)換為數(shù)字化的基因圖譜，精確讀出每個STR位點的等位基因大?。ㄖ貜痛螖?shù)）。生成包含所有檢測位點分型結(jié)果的表格。

6、質(zhì)量控制（貫穿全程）：

陰性對照：不含DNA模板的PCR反應，監(jiān)測試劑污染。

陽性對照：已知分型的標準品，監(jiān)測試劑和儀器性能。

內(nèi)標：確保片段大小判讀準確。

實驗分區(qū)：嚴格物理隔離（樣本制備區(qū)、PCR前區(qū)、PCR后區(qū)、檢測區(qū)），單向氣流，防止擴增產(chǎn)物污染。

人員資質(zhì)與操作規(guī)范：實驗人員需經(jīng)專業(yè)培訓，嚴格遵循SOP操作。

（四）數(shù)據(jù)分析與親權(quán)關(guān)系計算

1、數(shù)據(jù)審核：由技術(shù)員和審核員共同復核基因圖譜質(zhì)量及分型結(jié)果準確性。

2、三聯(lián)體分析：

通過比對孩子的STR位點，在排除母親基因貢獻后確定生父基因來源。若假定父親(AF)未檢出必需等位基因，則判定為"排除"。PI值按X/Y公式計算，其中X表示AF提供生父基因的概率，Y表示隨機人群攜帶該基因的概率。

3、二聯(lián)體分析：

直接分析孩子等位基因是否源自AF。計算PI值時需考慮基因可能來自母親的情況。

4、CPI計算：將各STR位點的PI值相乘得到CPI值，當CPI≥10000（相當于RCP≥99.99%）時支持親子關(guān)系認定。

5、RCP計算：RCP=CPI/(CPI+1)×100%，反映親子關(guān)系的統(tǒng)計學概率。

6、判定標準：

支持親子關(guān)系：所有檢測位點符合遺傳規(guī)律且CPI≥10000

排除親子關(guān)系：3個或以上位點不符合遺傳規(guī)律

無法結(jié)論：特殊情況需補充檢測

（五）報告出具

1、報告內(nèi)容：

包含機構(gòu)信息、委托方資料、被鑒定人信息、鑒定方法、試劑盒信息、分型結(jié)果、分析說明、鑒定意見、人員簽名及機構(gòu)蓋章等內(nèi)容。

2、報告簽發(fā)：由授權(quán)簽字人審核后簽發(fā)。

三、關(guān)鍵注意事項與局限性

1、資質(zhì)選擇：務必選擇具備《司法鑒定許可證》且鑒定范圍包含“法醫(yī)物證鑒定”的機構(gòu)，特別是用于司法訴訟、上戶口、移民等用途。個人隱私鑒定也需確保機構(gòu)技術(shù)可靠。

2、樣本真實性：樣本必須來自被鑒定人本人。司法鑒定通過現(xiàn)場采樣、身份核查、拍照錄像等確保。個人委托需自行保證樣本來源真實，否則結(jié)果無效。

3、污染風險：嚴格遵守采樣要求（戴手套、清潔環(huán)境、樣本獨立包裝干燥）。實驗室污染控制至關(guān)重要。

4、樣本質(zhì)量：樣本量不足、保存不當（霉變、高溫高濕）、含強抑制劑（如深色布料上的血痕）可能導致DNA提取失敗或分型不全。

5、基因突變：極少數(shù)情況下，子代可能發(fā)生新發(fā)突變，導致個別STR位點不符合遺傳規(guī)律（通常僅1個位點）。需結(jié)合CPI值和突變率進行專業(yè)分析判斷。

6、近親干擾：若假定父親與被鑒定孩子的生父有近親關(guān)系（如兄弟），可能導致CPI值升高，甚至錯誤地不排除親子關(guān)系。懷疑此情況需提前告知機構(gòu)，可能需要增加檢測位點或補充其他親屬樣本。

7、技術(shù)局限性：現(xiàn)有STR檢測技術(shù)對同卵**無法區(qū)分。對遠親關(guān)系（如表親）的鑒定能力有限，需要更復雜的檢測（如SNP測序、Y染色體/線粒體DNA檢測）。

8、報告解讀：報告結(jié)論是概率性判斷（支持或排除），非絕對“是”或“不是”。理解CPI和RCP的含義很重要。如有疑問，務必向鑒定機構(gòu)咨詢。

親子鑒定是建立在現(xiàn)代分子遺傳學基礎(chǔ)上的精密科學技術(shù)，其操作流程高度標準化、規(guī)范化，涉及嚴格的生物安全與質(zhì)量控制體系。理解其核心原理、關(guān)鍵操作步驟（尤其是樣本采集的規(guī)范性）以及結(jié)果的解讀方式（CPI/RCP），對于確保鑒定結(jié)果的準確可靠、維護各方合法權(quán)益至關(guān)重要。無論是出于司法需求還是個人解惑，都應秉持嚴肅、科學的態(tài)度，選擇正規(guī)、權(quán)威的鑒定機構(gòu)進行委托，并清晰了解其過程與意義。