在法庭的聚光燈尚未亮起之前，在法官的法槌尚未落下之前，一場(chǎng)無(wú)聲的較量已在PCR儀的嗡鳴聲中展開(kāi)。樣本的采集袋貼著防撕標(biāo)簽，離心機(jī)的轉(zhuǎn)子計(jì)數(shù)到小數(shù)點(diǎn)后四位，試劑批號(hào)與校準(zhǔn)日期被逐條錄入LIMS系統(tǒng)——這些看似瑣碎的動(dòng)作，其實(shí)都在為最后那一紙鑒定書(shū)筑起“不可推翻”的銅墻鐵壁。當(dāng)遺傳標(biāo)記的峰圖最終排列成無(wú)可爭(zhēng)議的階梯，靜默便擁有了比吶喊更大的力量。

一、親子鑒定核心技術(shù)原理
現(xiàn)代親子鑒定主要基于DNA分型技術(shù)，其核心在于比對(duì)分析個(gè)體間特定遺傳標(biāo)記（STR位點(diǎn)）的匹配程度。
人類遺傳基礎(chǔ)：
除同卵**外，每個(gè)人的DNA序列都具有獨(dú)特性。子女的遺傳物質(zhì)一半源自生物學(xué)父親，一半來(lái)自生物學(xué)母親。
STR位點(diǎn)解析：
即短串聯(lián)重復(fù)序列，指DNA上特定區(qū)域存在的重復(fù)堿基序列（如"AGAT"重復(fù)多次）。不同個(gè)體在同一STR位點(diǎn)上的重復(fù)次數(shù)往往存在差異。
分型檢測(cè)技術(shù)：
通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）對(duì)樣本DNA中的特定STR位點(diǎn)片段進(jìn)行擴(kuò)增，再運(yùn)用毛細(xì)管電泳等技術(shù)精確測(cè)定各STR位點(diǎn)的片段長(zhǎng)度（即重復(fù)次數(shù)），從而構(gòu)建個(gè)體的DNA遺傳圖譜。
親緣關(guān)系判定標(biāo)準(zhǔn)：
將被檢測(cè)兒童（C）的DNA圖譜與假定父親（AF）和/或假定母親（AM）的圖譜進(jìn)行比對(duì)分析。在每個(gè)檢測(cè)的STR位點(diǎn)上，孩子必須繼承一個(gè)來(lái)自生父的等位基因和一個(gè)來(lái)自生母的等位基因。通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法計(jì)算親權(quán)指數(shù)（PI）和累積親權(quán)指數(shù)（CPI），最終得出親權(quán)概率（RCP）。通常要求RCP≥99.99%才能確認(rèn)親子關(guān)系。

二、標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)操作流程
（一）樣本采集（關(guān)鍵第一步）
1、人員準(zhǔn)備：
確認(rèn)所有參與者的身份（司法鑒定需核對(duì)證件原件）。
簽署知情同意書(shū)（司法鑒定需按手?。?br />采集人員需佩戴干凈手套，必要時(shí)佩戴口罩、帽子。
2、常用樣本類型與采集方法：
口腔拭子（最常用、無(wú)創(chuàng)、推薦首選）：
請(qǐng)被采樣人清水漱口（半小時(shí)內(nèi)勿進(jìn)食飲水）。
取出無(wú)菌醫(yī)用棉簽，緊握棉簽桿，將棉簽頭在口腔內(nèi)壁（臉頰內(nèi)側(cè)）用力旋轉(zhuǎn)刮擦至少20-30次，確保充分接觸粘膜細(xì)胞。同法采集另一側(cè)。
將棉簽垂直放置在清潔的采樣卡或干凈白紙上，自然晾干（避免陽(yáng)光直射、熱源烘烤，切勿用嘴吹）。
完全干燥后（通常需30-60分鐘），放入干凈的紙質(zhì)信封袋，標(biāo)記清晰信息（姓名、采樣日期、關(guān)系如“子”、“父”等）。切勿使用塑料袋密封，以防霉變。
關(guān)鍵點(diǎn)：避免棉簽接觸其他物品；確保充分刮擦獲得足夠細(xì)胞；徹底干燥是防止霉變降解的關(guān)鍵。
靜脈血（司法鑒定常用）：
由專業(yè)醫(yī)護(hù)人員操作。
常規(guī)消毒穿刺部位，抽取適量靜脈血（通常2-5mlEDTA抗凝血）。
輕輕顛倒混勻抗凝管數(shù)次。
標(biāo)記清楚，按機(jī)構(gòu)要求保存（通常4℃冷藏）和運(yùn)輸。
血痕樣本：
消毒指尖（或耳垂），用一次性采血針輕刺。
取3-5滴血液（每滴約黃豆大?。┑卧趯Ｓ貌裳ǎㄈ鏔TA卡）或干凈濾紙上。
自然晾干（避免重疊、污染、暴曬、烘烤）。
完全干燥后放入紙質(zhì)信封袋，標(biāo)記清楚。
特殊樣本（如毛發(fā)、煙頭、口香糖、精斑等）：
此類樣本DNA含量少或易降解，需特殊處理，務(wù)必提前咨詢鑒定機(jī)構(gòu)確認(rèn)是否可檢及具體要求。
例如毛發(fā)：需帶有肉眼可見(jiàn)的毛囊（根部白色小囊），至少5-8根。手捏毛干部分取下，勿觸碰毛囊。晾干后放入紙袋。
3、樣本標(biāo)記與封裝：
每個(gè)樣本獨(dú)立包裝，在包裝袋外清晰、牢固地標(biāo)記唯一編號(hào)、姓名（或代號(hào)）、樣本類型、采樣日期、關(guān)系。
所有樣本連同填寫(xiě)完整的委托書(shū)、身份證明復(fù)印件（司法鑒定需要）等一同放入大信封或樣本盒。司法鑒定樣本需當(dāng)場(chǎng)封存，當(dāng)事人及采樣人簽字/按手印確認(rèn)。
生物安全：所有樣本均視為潛在生物危害物，封裝需防泄漏，運(yùn)輸需符合相關(guān)生物安全規(guī)定。
（二）樣本保存與運(yùn)輸
口腔拭子/血痕卡：常溫、干燥、避光保存。盡快送檢（通常建議采樣后一周內(nèi)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室）。避免高溫、高濕、化學(xué)污染。
靜脈血：需冷藏（2-8℃）保存和運(yùn)輸（冰袋或冷鏈）。嚴(yán)禁冷凍，否則會(huì)溶血破壞細(xì)胞。盡快送檢（通常建議24-48小時(shí)內(nèi)）。
特殊樣本：按機(jī)構(gòu)具體要求保存（如冷凍、干燥等），盡快送檢。
運(yùn)輸：選擇可靠的快遞公司，確保包裝牢固、防壓、防漏、符合生物安全要求。告知快遞內(nèi)含生物樣本。
（三）實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)
樣本抵達(dá)具備資質(zhì)的實(shí)驗(yàn)室后，將經(jīng)歷嚴(yán)格流程：
1、樣本接收與登記：核對(duì)樣本信息、數(shù)量、狀態(tài)（是否污染、霉變、滲漏等），登記入庫(kù)，分配唯一實(shí)驗(yàn)編號(hào)。狀態(tài)異常會(huì)聯(lián)系委托方。
2、DNA提?。?/strong>在專門(mén)的樣本制備區(qū)進(jìn)行。
口腔拭子/血痕卡：剪下含樣本部分，使用裂解液（含蛋白酶K）消化細(xì)胞膜、核膜，釋放DNA。
靜脈血：離心分離白細(xì)胞，裂解釋放DNA。
特殊樣本：采用針對(duì)性方法（如毛囊刮取、精斑浸泡等）提取。
通過(guò)離心柱吸附法或磁珠法等純化DNA，去除雜質(zhì)（蛋白質(zhì)、色素、抑制劑等）。
3、DNA定量與質(zhì)檢：使用紫外分光光度計(jì)或熒光定量?jī)x測(cè)量DNA濃度和純度（如A260/A280比值），確保提取的DNA質(zhì)量和數(shù)量滿足后續(xù)PCR擴(kuò)增要求。
4、PCR擴(kuò)增：在PCR準(zhǔn)備區(qū)配置反應(yīng)體系。
將提取的DNA、引物（特異性識(shí)別STR位點(diǎn)兩端）、TaqDNA聚合酶、dNTPs（合成原料）、緩沖液等混合。
在PCR儀中進(jìn)行熱循環(huán)：變性（高溫解鏈DNA）→退火（引物結(jié)合到模板）→延伸（合成新鏈）。經(jīng)過(guò)約30個(gè)循環(huán)，目標(biāo)STR片段被指數(shù)級(jí)擴(kuò)增。
5、STR分型檢測(cè)：在擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)進(jìn)行。
毛細(xì)管電泳（主流方法）：將PCR產(chǎn)物與內(nèi)標(biāo)（SizeStandard）和去離子甲酰胺混合，上樣到毛細(xì)管電泳儀。在高電壓下，不同長(zhǎng)度的DNA片段在毛細(xì)管內(nèi)的聚合物中遷移速度不同。通過(guò)激光激發(fā)熒光標(biāo)記（引物上帶有不同顏色的熒光染料），檢測(cè)器記錄每個(gè)片段的出峰時(shí)間和熒光顏色。
數(shù)據(jù)采集與分析：專業(yè)軟件將電泳信號(hào)轉(zhuǎn)換為數(shù)字化的基因圖譜，精確讀出每個(gè)STR位點(diǎn)的等位基因大?。ㄖ貜?fù)次數(shù)）。生成包含所有檢測(cè)位點(diǎn)分型結(jié)果的表格。
6、質(zhì)量控制（貫穿全程）：
陰性對(duì)照：不含DNA模板的PCR反應(yīng)，監(jiān)測(cè)試劑污染。
陽(yáng)性對(duì)照：已知分型的標(biāo)準(zhǔn)品，監(jiān)測(cè)試劑和儀器性能。
內(nèi)標(biāo)：確保片段大小判讀準(zhǔn)確。
實(shí)驗(yàn)分區(qū)：嚴(yán)格物理隔離（樣本制備區(qū)、PCR前區(qū)、PCR后區(qū)、檢測(cè)區(qū)），單向氣流，防止擴(kuò)增產(chǎn)物污染。
人員資質(zhì)與操作規(guī)范：實(shí)驗(yàn)人員需經(jīng)專業(yè)培訓(xùn)，嚴(yán)格遵循SOP操作。
（四）數(shù)據(jù)分析與親權(quán)關(guān)系計(jì)算
1、數(shù)據(jù)審核：由技術(shù)員和審核員共同復(fù)核基因圖譜質(zhì)量及分型結(jié)果準(zhǔn)確性。
2、三聯(lián)體分析：
通過(guò)比對(duì)孩子的STR位點(diǎn)，在排除母親基因貢獻(xiàn)后確定生父基因來(lái)源。若假定父親(AF)未檢出必需等位基因，則判定為"排除"。PI值按X/Y公式計(jì)算，其中X表示AF提供生父基因的概率，Y表示隨機(jī)人群攜帶該基因的概率。
3、二聯(lián)體分析：
直接分析孩子等位基因是否源自AF。計(jì)算PI值時(shí)需考慮基因可能來(lái)自母親的情況。
4、CPI計(jì)算：將各STR位點(diǎn)的PI值相乘得到CPI值，當(dāng)CPI≥10000（相當(dāng)于RCP≥99.99%）時(shí)支持親子關(guān)系認(rèn)定。
5、RCP計(jì)算：RCP=CPI/(CPI+1)×100%，反映親子關(guān)系的統(tǒng)計(jì)學(xué)概率。
6、判定標(biāo)準(zhǔn)：
支持親子關(guān)系：所有檢測(cè)位點(diǎn)符合遺傳規(guī)律且CPI≥10000
排除親子關(guān)系：3個(gè)或以上位點(diǎn)不符合遺傳規(guī)律
無(wú)法結(jié)論：特殊情況需補(bǔ)充檢測(cè)
（五）報(bào)告出具
1、報(bào)告內(nèi)容：
包含機(jī)構(gòu)信息、委托方資料、被鑒定人信息、鑒定方法、試劑盒信息、分型結(jié)果、分析說(shuō)明、鑒定意見(jiàn)、人員簽名及機(jī)構(gòu)蓋章等內(nèi)容。
2、報(bào)告簽發(fā)：由授權(quán)簽字人審核后簽發(fā)。