指甲作為非標(biāo)準(zhǔn)生物樣本，其DNA提取成功率受采集方式直接影響。正確掌握采集技術(shù)，可使指甲樣本檢測(cè)準(zhǔn)確率提升至80%以上，成為特殊情況下確認(rèn)親緣關(guān)系的重要選擇。

一、樣本采集標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范

工具準(zhǔn)備

使用75%酒精浸泡過(guò)的指甲刀，優(yōu)先選擇不銹鋼材質(zhì)工具。采集前用紫外線燈對(duì)操作臺(tái)消毒30分鐘，避免使用美容店常用的電動(dòng)磨甲器。

有效部位選取

剪取指甲根部3mm處連帶甲床組織，手指甲比腳趾甲更易提取DNA。嬰幼兒需采集10片以上，成人至少6片，每片寬度需超過(guò)2mm。

特殊處理要求

美甲患者需清除甲油膠后靜置72小時(shí)，灰指甲患者應(yīng)采集病甲與健康甲混合樣本。美甲殘留的化學(xué)物質(zhì)可能抑制DNA聚合酶活性。

二、操作流程分解

清潔預(yù)處理

采樣前用生理鹽水浸泡雙手15分鐘，去除皮膚碎屑。禁用肥皂或消毒液，避免破壞角蛋白結(jié)構(gòu)。

剪切角度控制

刀口與甲面呈45度切入，確保獲取甲床附著物。剪取動(dòng)作需連貫，避免反復(fù)修剪同片指甲。

干燥保存方式

樣本置于無(wú)菌濾紙陰干2小時(shí)，忌用吹風(fēng)機(jī)或日照加速干燥。密封袋內(nèi)需放入干燥劑，標(biāo)注采集時(shí)間精確到分鐘。

三、關(guān)鍵控制要點(diǎn)

時(shí)間窗口把握

剪下后24小時(shí)內(nèi)送檢效果，常溫保存不超過(guò)72小時(shí)。冬季采集需防止冷凝水產(chǎn)生，建議使用防潮鋁箔袋包裝。

污染防控措施

操作全程佩戴醫(yī)用橡膠手套，每采集1人更換新手套。混入他人指甲需重新采集，實(shí)驗(yàn)室可通過(guò)STR分型識(shí)別混合樣本。

特殊人群處理

礦工等職業(yè)群體需采集深層指甲，美發(fā)從業(yè)者應(yīng)延長(zhǎng)酒精消毒時(shí)間至5分鐘。長(zhǎng)期接觸化學(xué)制劑者建議配合提供頭發(fā)樣本。

四、檢測(cè)技術(shù)適配

微量DNA提取

采用硅珠法結(jié)合蛋白酶K消化，可提取0.01ng/μl濃度的DNA片段。實(shí)驗(yàn)室需配備ABI7500實(shí)時(shí)定量PCR儀進(jìn)行濃度測(cè)定。

STR分型優(yōu)化

使用AmpF?STR®Identifiler®Plus試劑盒，將PCR循環(huán)數(shù)增加至32次。對(duì)降解DNA樣本采用miniSTR檢測(cè)技術(shù)，縮短擴(kuò)增片段長(zhǎng)度。

數(shù)據(jù)驗(yàn)證機(jī)制

每份樣本設(shè)置3組平行檢測(cè)，出現(xiàn)1個(gè)位點(diǎn)缺失需重新提取。采用Y-STR聯(lián)合檢測(cè)技術(shù)提高父子關(guān)系的認(rèn)定。

五、司法鑒定特殊要求

法律用途的指甲采集需在公證人員見證下進(jìn)行，全程視頻記錄封裝過(guò)程。每片指甲單獨(dú)編號(hào)，使用防拆封條密封。疑似父、母、子三方樣本需同步采集，形成完整證據(jù)鏈。

六、常見問(wèn)題應(yīng)對(duì)

采集量不足補(bǔ)救

將已采指甲研磨成粉狀，加入Chelex-100提取液震蕩2小時(shí)。配合使用全基因組擴(kuò)增技術(shù)，可使DNA含量提升1000倍。

霉變樣本處理

使用1%次氯酸鈉浸泡5秒后快速?zèng)_洗，重點(diǎn)檢測(cè)線粒體DNA的HVⅠ、HVⅡ區(qū)段。霉變樣本檢測(cè)成功率約為正常樣本的60%。

嬰幼兒采集技巧

趁熟睡時(shí)用嬰兒專用指甲鉗采集，可配合使用皮膚軟化劑。建議采集手腳指甲混合樣本，降低單個(gè)指甲無(wú)效風(fēng)險(xiǎn)。

正確采集指甲樣本可避免當(dāng)事人尷尬，特別適合保密性要求高的檢測(cè)需求。需注意非司法鑒定報(bào)告可能不被法律認(rèn)可，建議提前與檢測(cè)機(jī)構(gòu)確認(rèn)用途。專業(yè)實(shí)驗(yàn)室通常提供采樣指導(dǎo)服務(wù)，通過(guò)視頻連線實(shí)時(shí)糾正操作誤差，確保每個(gè)細(xì)節(jié)符合檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。