第12節(jié)　免疫學(xué)檢查
 
  免疫不育包括男性抗精子自身免疫不育－女性抗精子同種免疫不育的女性抗透明帶免疫不育。
 
  一、抗精子免疫不育的檢查
 
  抗精子免疫抗精子體液免疫（抗精子抗體）和抗精子細(xì)胞免疫。
 
（一）抗精子抗體的檢測(cè)
 
  1.后試驗(yàn)　于后6-24h內(nèi)取宮頸粘液，在高倍鏡下觀察計(jì)數(shù)精子數(shù)。每高倍視野中，有>=21條檢度活潑的精子者為比較好，有6-20條很活潑的精子為良好，有1-5條活動(dòng)精子屬尚好，有少數(shù)不活動(dòng)精子為較差，無(wú)精子者為陰性。
  實(shí)驗(yàn)受測(cè)試夫婦心理和情緒情況及宮頸粘液中的理化特征等非免疫性因素的影響，可作為檢測(cè)生殖道局部抗精子抗體的初篩手段。
 
  2.精子-宮頸粘液接觸或穿透試驗(yàn)（SCMC或s-c　MPT）SCMC是將與排卵前宮頸粘液混合孵育，鏡下觀察精子震顫現(xiàn)象，>50%為陽(yáng)性，提示可能有局部抗精子抗體存在，s-c　MPT是將宮頸粘液裝于毛細(xì)血管中，開(kāi)口端加孵育后鏡下觀察5個(gè)以上活精子到達(dá)的最遠(yuǎn)距離，<20mm為穿透不良，>20mm為穿透良好。本試驗(yàn)可受非免疫因素影響，如精子的活力、宮頸粘液的理化性質(zhì)等。
 
  3.精子凝集試驗(yàn)　精子抗原與抗體結(jié)合后可發(fā)生凝集反應(yīng)，凝集反應(yīng)是抗原與特異性抗體反應(yīng)的傳統(tǒng)及敏感的方法，通過(guò)肉眼或顯微鏡觀察結(jié)果。檢測(cè)方法包括下列幾種。
 
（1）明膠凝集試驗(yàn)（GAT）：適當(dāng)稀釋的精子懸液與10%明膠溶液混合后加入待測(cè)血清孵育，2h后若出現(xiàn)絮狀物為陽(yáng)性。此法簡(jiǎn)便，每次設(shè)陰性及陽(yáng)性對(duì)照組，則結(jié)果較可靠。
 
（2）試管玻片凝集試驗(yàn)（TSAT）：按要求稀釋的精子懸液與待測(cè)血清孵育2-4h后，鏡下觀察>=10%凝集為陽(yáng)性。此法能觀察凝集類型，方法簡(jiǎn)便，但可受多種因素干擾，如微生物、組織碎片，血中雄激素升高，均可發(fā)生非特異性凝集。每次試驗(yàn)需設(shè)對(duì)照組。
 
（3）淺盤凝集試驗(yàn)（TAT）：使用特制淺盤，只需檢測(cè)樣本幾微升（ul），在倒置顯微鏡下觀察>=10%凝集為陽(yáng)性。此法所用樣本較TSAT少，可同時(shí)檢測(cè)較多的血清樣本，較GAT敏感，亦少受非特異性因素干擾。若血清效價(jià)>=1：32，則可認(rèn)為確含精子抗體。
   其他尚有毛細(xì)管凝集法及平板凝集法，較少用。
 
  4.補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒試驗(yàn)及精子制動(dòng)試驗(yàn)　精子抗體與精子抗原結(jié)合，激活補(bǔ)體系統(tǒng)，導(dǎo)致細(xì)胞膜通透性及完整性的損害，若為制動(dòng)抗體，使精子失去活力，制動(dòng)值>=2為陽(yáng)性；若為細(xì)胞毒抗體，則用某些染料染色陽(yáng)性，要求精子活率>70%。微量法僅需樣本幾微升，對(duì)精子活動(dòng)率較低的樣本，可用上游法提取活精子，活率可達(dá)90%以上。本法僅能檢測(cè)作用于精子尾干的抗體。特異性強(qiáng)，敏感性差，假陰性率較高。
 
  5.被動(dòng)血凝法　用精子提取物及精漿包被經(jīng)處理的紅細(xì)胞使之致敏，將致每紅細(xì)胞與待測(cè)稀釋血清在微量反應(yīng)板上進(jìn)行反應(yīng)，出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集為陽(yáng)性。此法不受精子活率、計(jì)數(shù)、中微生物或組織碎片的影響，研究者認(rèn)為此法特異、敏感，但報(bào)道較少，其可靠性及實(shí)用性尚待證實(shí)。
 
  6.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）及生物素-親合素酶聯(lián)免疫吸附法（BA-ELISA）應(yīng)用完整精子或精子膜抗原包被固相載體，待測(cè)樣本中精子抗體與之培養(yǎng)后可結(jié)合于抗原表面。隨之酶標(biāo)第二抗體亦可結(jié)合其表面，后經(jīng)加酶底物，根據(jù)底物顯況判斷結(jié)果?？捎萌庋塾^察，亦可用酶標(biāo)儀測(cè)定，后者客觀準(zhǔn)確，一般以大于一組陰性血清光密度均值加2倍標(biāo)準(zhǔn)為陽(yáng)性。由于完整精子包被易致非特異性吸附，因此若以可溶性精子膜抗原包被，則本法敏感、特異、客觀、定量，能確定抗體類型，且易操作。BA-ELISA是在常規(guī)ELISA基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的新一代定量檢測(cè)法，其敏感法性、特異性超過(guò)常規(guī)法。
 
  7.免疫珠試驗(yàn)（Immunbead Test,IBT） 用抗人免疫球蛋白抗體包被的聚丙烯酰胺微能結(jié)合于結(jié)合了精子抗體的精子表面，在相差顯微鏡或電子顯微鏡下可見(jiàn)到免疫珠隨精子運(yùn)行，若結(jié)合一個(gè)或多個(gè)免疫珠的精子比例>=10%為陽(yáng)性。此法可確定抗體的部位、類型及結(jié)合精子的比例，能測(cè)出活精子表面結(jié)合的抗體。其敏感性、特異性及重復(fù)性較好，操作稍繁瑣，檢測(cè)所需樣本少，可用于宮頸粘液、輸卵管液等微量樣本的檢測(cè)。
 
  8.放射性標(biāo)記免疫球蛋白或A蛋白法　同位素標(biāo)記的抗人免疫球蛋白或葡萄球菌A蛋白與結(jié)合在精子表面的精子抗體結(jié)合，用X計(jì)數(shù)器測(cè)定精子表面的放射活性。若以活精子作為抗原其特異性及敏感性較高，且可確定抗體類型。但由于每次實(shí)驗(yàn)活動(dòng)精子來(lái)源不同，其結(jié)果重復(fù)性較差；且設(shè)備昂貴，操作者易受放射性損害，故此法報(bào)道較少。
 
  9.間接免疫熒光試驗(yàn)　精子表面結(jié)合于抗原后，能與標(biāo)有熒光素的第二抗體結(jié)合，在熒光顯微鏡下觀察呈現(xiàn)熒光的陽(yáng)性精子比例。因試驗(yàn)中需要甲醇固定致精子膜損傷，內(nèi)部抗原外露，而抗內(nèi)部抗原的抗體在正常人中普遍存在，故假陽(yáng)性太，無(wú)臨床實(shí)用價(jià)值。近年來(lái)，作液相培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中無(wú)需固定，又重新確定了本法的使用價(jià)值。
 
  10.精卵相互俢直接檢查法
 
（1）精子-透明帶結(jié)合或穿透試驗(yàn)：自腹腔鏡檢查中獲得的人卵與精子在一定條件下孵育后，觀察精子能否穿過(guò)透明帶進(jìn)入細(xì)胞周圍的空間，若精子不能穿過(guò)透明帶，考慮有制動(dòng)抗體存在，此試驗(yàn)亦受其它因素干擾。
 
（2）精子-去透明倉(cāng)鼠卵穿透試驗(yàn)（SPA）：將優(yōu)化提取的的活精子與無(wú)帶倉(cāng)鼠卵混合孵育，在相差顯微鏡下觀察，若卵內(nèi)含腫脹精子頭（帶尾）為已經(jīng)穿透。SPA可用于判定：①有精漿抗體的精子的受精能力；②各種抗體在阻止受孕時(shí)的重要性。此試驗(yàn)也可受多種因素影響。
 
（二）抗精子細(xì)胞免疫的檢測(cè)
 
  對(duì)細(xì)胞介導(dǎo)的抗精子免疫的研究資料較少，各家結(jié)論不一。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及人體檢測(cè)表明，抗精子細(xì)胞免疫可可甬不育的原因之一。
 
  檢測(cè)細(xì)胞介導(dǎo)抗精子免疫反應(yīng)的試驗(yàn)主要有淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)、白細(xì)胞粘附抑制試驗(yàn)、白細(xì)胞或巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制試驗(yàn)、皮膚試驗(yàn)及外周血白細(xì)胞促凝血活性法等。所采用的抗原不一，有新鮮洗滌精子、凍融精子、半純化精子等。目前，因使用的抗原不統(tǒng)一，檢測(cè)方法各異，研究倒數(shù)較少，各種方法的特異性尚難評(píng)價(jià)，其結(jié)果亦難于比較。
 
  二、抗透明帶免疫性不孕癥的檢測(cè)
 
  人卵透明帶來(lái)源有限，很難獲取，但人透明帶與豬透明帶間有交叉抗原性，因此實(shí)際工作均用豬透明帶代替人卵透明帶用于檢測(cè)人血清中透明帶抗體。由于部分正常粉血清中存在異種凝集素（主要為IgM）干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果，因此檢測(cè)前需用新鮮豬紅細(xì)胞待測(cè)血清。
 
  1.透明帶沉淀反應(yīng)　透明帶表面結(jié)合抗體后，在光鏡或暗視野鏡下呈現(xiàn)折光改變。本法多用于鑒定血清、敏感性低，難用于臨床。
 
  2.放射免疫法　用放射性標(biāo)記的豬透明帶抗原與待血清培養(yǎng)后，分離出抗原體復(fù)全物，測(cè)定其放射性。本法能定量，特異性及敏感性較好，但由于放射性損害，且報(bào)道不多，故本法尚難肯定。
 
  3.間接免疫熒光試驗(yàn)　人抗透明帶抗體結(jié)合至豬卵表面后，標(biāo)有熒光素的抗人免疫球蛋白抗體隨之結(jié)合至透明帶表面，在熒光顯微鏡呈現(xiàn)明顯的卵周熒光。本法的可靠性有賴于其它客觀方法證實(shí)。
 
  4.ELISA及BA－ELISA法　以豬透明帶抗原包被固相載體，另加待測(cè)血清、酶標(biāo)第二抗體及底物，分步培養(yǎng)洗滌，最后根據(jù)底物顏色變化情況判斷情況。本法所需樣本量少，無(wú)需特殊設(shè)備，操作簡(jiǎn)便，能定量測(cè)定抗體并確定抗體類型，特異性及敏感性較好。BA－ELISA具有常規(guī)ELISA的優(yōu)點(diǎn)，而其敏感性大為提高。
 
  5.被動(dòng)血凝法　用純化的豬透明帶抗原包被其他物種的紅細(xì)胞為抗原靶標(biāo)，在存在透明帶抗體的情況下，致敏紅細(xì)胞發(fā)生凝集。此法研究報(bào)道較少，難以評(píng)價(jià)其敏感性和特異性。
 
  6.精子－透明帶結(jié)合或穿透試驗(yàn)　若存在透明帶抗體或抗精子抗體，此法均可陽(yáng)性。由于試驗(yàn)受培養(yǎng)環(huán)境因素影響較大，故對(duì)不同實(shí)驗(yàn)室的研究結(jié)果難以比較。此法可與其它方法配合應(yīng)用，相互補(bǔ)充，以保證結(jié)果的可靠性。